蛋白质浓度的测定实验报告 双缩脲测定蛋白质浓度
常用的测定蛋白质含量的方法有哪些？蛋白质含量的测定方法有哪些？有许多定量测定蛋白质的方法。目前常用的方法有染料法、缩二脲法、酚试剂法、紫外吸收法、杜马斯燃烧定氮法，最常用的方法是凯氏定氮法，如何准确测定样品中蛋白质的含量通常用紫外分光光度法测定蛋白质的含量。
测定:取两个干净的试管(重复)，加入适当浓度的待测样品，使测定值在标准曲线范围内。测定方法同上，根据样品溶液的吸光度查标准曲线即可得到含量。注意事项:1。如果要求严格，最好在试剂加入后的5~20min内测量吸光值，因为这段时间颜色最稳定。2.如果选择在涡旋混合器上混合，注意不要太剧烈，以免产生大量难以消除的气泡。
紫外分光光度法测定蛋白质。给出以下引文:蛋白质含量的六种测定方法。1.痕量凯氏定氮样品与浓硫酸共加热。含氮有机物分解产生氨(消化)，氨与硫酸反应生成硫酸铵。碱化后分解释放出氨，用蒸汽将氨蒸成酸性溶液。根据这种酸性溶液的中和程度，可以计算出样品的氮含量。如果以甘氨酸为例，反应式如下:NH 2ch2 cooh 3 H2 so 42 co 23 so 24 H2O NH3(1)2 NH 3 H2 so 4(NH4)2so 4(2)(NH4)2so 4 2 NaOH 2H2O na2so 4 2 NH3(3)反应(1)和(2)在凯氏烧瓶中完成，反应(3)在凯氏蒸馏单元中进行。
①凯氏定氮法原理:蛋白质中平均含氮量为16%。当样品用浓硫酸加热时，蛋白质氮转化为铵盐。在强碱性条件下，氨被蒸发并被带有指示剂的硼酸吸收。最后用标准酸滴定硼酸，通过标准酸的量可以计算出蛋白质中的氮含量和蛋白质含量。②缩二脲法原理:尿素在180℃脱氨基形成缩二脲，在碱性溶液中能与Cu2形成稳定的紫红色络合物。蛋白质中的肽键实际上是一个酰胺键，所以肽、蛋白质等。都有缩二脲反应生成蓝色或紫色的络合物。
缺点:灵敏度低，样品必须是可溶的，在含有大量糖和脯氨酸的多肽中颜色不好。其准确度差(几毫克)，会受到样品中硫酸铵和Tris的干扰，但准确度高，不受蛋白质种类的影响。(3)福林酚法(Lowry)福林酚法是缩二脲法的延伸，所用试剂由试剂A和试剂B组成..试剂A相当于缩二脲试剂(碱性铜试剂)，试剂B含有磷钼酸和磷钨酸。
1。痕量凯氏定氮样品与浓硫酸一起加热。含氮有机物分解产生氨(消化)，氨与硫酸反应生成硫酸铵。碱化后分解释放出氨，用蒸汽将氨蒸成酸性溶液。根据这种酸性溶液的中和程度，可以计算出样品的氮含量。如果以甘氨酸为例，反应式如下:NH 2ch2 cooh 3 h2so 4――2co 3 so 24 H2O NH3(1)2 NH 3 h2so 4 ――( NH4)2so 4(2)(NH4)2so 4 2 NaOH――2h2o na2so 4 2 NH3(3)反应(1)和(2)在凯氏烧瓶中完成。
在酸性条件下，考马斯亮蓝G250染料与蛋白质的疏水区结合，导致最大吸收峰从465nm变为595nm，颜色也从棕色变为蓝色。这种蓝色化合物的颜色与蛋白质浓度成正比。常用的蛋白质纯化方法有离子交换层析、亲和层析、电泳、疏水层析等。像氨基酸一样，蛋白质是两性的，其电荷取决于溶液的ph值。ph小于π时蛋白质带正电，ph大于π时蛋白质带负电。
【答案】:AA项，凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮含量的方法。蛋白质中的氮含量相对恒定，可以由氮含量计算出蛋白质含量，因此该方法是一种经典的蛋白质定量方法。B项中，双缩脲试验产生的紫色络合物的颜色与蛋白质的浓度成正比，因此可以用来测定蛋白质的含量。是目前第一个推荐的蛋白质定量方法。C项中，酚试剂法的显色原理与双缩脲法相同，只是增加了第二种试剂福林酚试剂，增加了显色量，从而提高了检测蛋白质的灵敏度。
蛋白质的含量通常用紫外分光光度法测定。引用以下语录:1。痕量凯氏定氮法样品用浓硫酸加热。含氮有机物分解产生氨(消化)，氨与硫酸反应生成硫酸铵。它被强碱分解释放出氨，氨被蒸汽蒸发成酸性溶液。根据酸溶液的中和度，可以计算出样品的氮含量。如果以甘氨酸为例，反应式如下:NH 2 cooh 3 h2so 4·24H2O NH3(1)2 NH 3 h2so 4(NH4)2so 4(2)(NH4)2so 4 2 NaOH 2H2O na2so 4·2nh 3(3)反应(1)和(2)在凯氏烧瓶中完成。
Cuso4可作为催化剂加入，k2so4可用于提高溶液的沸点。硼酸溶液可用于收集氨，强酸可用于滴定。这里省略了实验和计算方法。计算结果是样品的总氮含量。如果你想得到样品中的蛋白质含量，你应该从总氮含量中减去非蛋白氮。如果想进一步得到样品中的蛋白质含量，可以将样品中的蛋白质氮乘以6.25得到。二、缩二脲法(Biret法)(1)。
测定蛋白质的定量方法有很多。目前常用的方法有染料法、缩二脲法、酚试剂法、紫外吸收法、杜马斯燃烧定氮法，最常用的方法是凯氏定氮法。蛋白质的测定有许多定量方法。目前常用的方法有:1。染色法；2.缩二脲法；3.苯酚试剂法；4.紫外线吸收法。看吧。紫外分光光度法，缩二脲可见分光光度法，凯氏法。缩二脲试剂变紫，说明含有蛋白质。
9、蛋白质浓度测定方法蛋白质浓度的测定方法如下:1。缩二脲法检测原理:缩二脲是两分子尿素缩合形成的化合物，在碱性溶液中与硫酸铜反应生成紫红色的络合物，这个反应就是缩二脲试验，含有两个或两个以上肽键的化合物都有缩二脲试验。蛋白质含有多个肽键，在碱性溶液中能与Cu2络合形成紫红色化合物(540nm)，它的颜色深浅与蛋白质的浓度成正比。2.Lowry法检测原理:Lowry法是双缩脲法和弗林酚法的结合和发展。
