Folin试剂甲 Folin试剂光度法
(3)福林酚法(Lowry)福林酚法是缩二脲法的延伸，所用试剂由试剂A和试剂B组成..福林酚试剂法测定蛋白质含量的注意事项，加入福林酚试剂时要特别小心，因为试剂只在酸性pH下稳定，但上述还原反应只在pH10时发生。因此，在碱性铜蛋白溶液中加入福林酚试剂时，必须立即搅拌，这样才能在磷钨酸磷钼酸试剂被破坏之前发生还原反应。
包括两步:(1)在碱性条件下，蛋白质与铜反应生成蛋白铜络合物。(2)此络合物还原试剂磷钨酸磷钼酸(福林试剂)，混合物呈深蓝色(磷钼酸蓝和磷钨酸蓝的混合物)，颜色深浅与蛋白质含量成正比。该方法操作简便，灵敏度比双缩脲法高100倍，定量范围为5~100μg蛋白质。福林试剂的显色反应是由酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸引起的，所以如果样品中含有酚类、柠檬酸和巯基化合物，就会产生干扰。
①凯氏定氮法原理:蛋白质中平均含氮量为16%。当样品用浓硫酸加热时，蛋白质氮转化为铵盐。在强碱性条件下，氨被蒸发，用带指示剂的硼酸吸收。最后用标准酸滴定硼酸，通过标准酸的量可以计算出蛋白质中的氮含量和蛋白质含量。②缩二脲法原理:尿素在180℃脱氨基形成缩二脲，在碱性溶液中能与Cu2形成稳定的紫红色络合物。蛋白质中的肽键实际上是一个酰胺键，所以肽、蛋白质等。都有缩二脲反应生成蓝色或紫色的络合物。
缺点:灵敏度低，样品必须是可溶的，在含有大量糖和脯氨酸的多肽中颜色不好。其准确度差(几毫克)，会受到样品中硫酸铵和Tris的干扰，但准确度高，不受蛋白质种类的影响。(3)福林酚法(Lowry)福林酚法是缩二脲法的延伸，所用试剂由试剂A和试剂B组成..试剂A相当于缩二脲试剂(碱性铜试剂)，试剂B含有磷钼酸和磷钨酸。
1。干扰物质该方法在福林酚法的基础上引入了缩二脲试剂，因此所有干扰缩二脲试验的基团，如CONH2、CH2NH2、CSNH2，以及自然界中为氨基酸或肽的缓冲液，如Tris缓冲液、蔗糖、硫酸铵、巯基化合物等，均可干扰福林酚反应。此外，如果蛋白质样品中含有酚类和柠檬酸，它们会干扰这一反应。而低浓度的尿素(约0.5%)、胍(约0.5%)、硫酸钠(1%)、硝酸钠(1%)、三氯乙酸(0.5%)、乙醇(5%)、乙醚(5%)和丙酮(0.5%)对显色没有影响，这些物质对显色没有影响。
如果样品酸度较高，需要将碳酸钠和氢氧化钠的浓度提高12倍，这样可以纠正显色后颜色变浅的缺点。2.控制时间由于劳里反应的显色随时间加深，每次操作必须准确控制时间。即在第一个试管中加入2.0ml碱性硫酸铜试剂后开始计时，1分钟后第二个试管加入2.0ml碱性硫酸铜试剂，2分钟后加入第三个试管，以此类推。
folin酚试剂法用于测定蛋白质含量的仪器有分光光度计、台式离心机、精密天平、三角瓶、烧杯、量筒、移液器、0.5MNaOH试剂A:称取10gNa2CO3、2gNaOH、0.25g酒石酸钾钠，溶解，用蒸馏水定容至500mL。称取0.5gCuSO45H2O，溶解，用蒸馏水定容至100mL。每次使用前，将CuSO4溶液与前体溶液以1: 50的比例混合，即试剂A，其有效期为1d，过期作废。
测量时，加入福林酚试剂时要特别小心，因为该试剂仅在酸性pH下稳定，但上述还原反应仅在pH10时发生。因此，在碱性铜蛋白溶液中加入福林酚试剂时，必须立即搅拌，这样才能在磷钨酸磷钼酸试剂被破坏之前发生还原反应。该方法也适用于酪氨酸和色氨酸的定量测定。
6、folin酚试剂法测定蛋白质含量误差分析1、蛋白质分子中所含的肽键在碱性条件下能与Cu2结合形成蛋白质Cu2复合物，即发生缩二脲试验。该配合物中含有酚羟基的酪氨酸或色氨酸残基能还原福林酚试剂的磷钼酸磷钨酸盐生成蓝色化合物，即发生福林酚的显色反应，同时，福林酚试剂在碱性条件下极不稳定，容易被蛋白质还原成蓝色反应。2.在一定浓度范围内，蓝色化合物的蓝色深度与蛋白质浓度成正比。
