总蛋白提取试剂盒,细菌总蛋白提取试剂盒
绿僵菌destruxinA对昆虫细胞的结合蛋白DestruxinA(DA)是一种从昆虫病原真菌Metarhiziumspp.中分离出来的环六肽类杀虫霉菌毒素。为了探索本研究中DA的MOA,我们分离并鉴定了家蚕Bm12细胞系中的DA结合蛋白,我们分析了DA引起细胞毒性的分子机制,并使用电子显微镜评估结果以验证表型,细胞在含有10%胎牛血清的Grace昆虫培养基中培养。

对数期细胞用于实验。用二甲基亚砜溶解,浓度为10,000mg/L,用培养基稀释至实验工作浓度,细胞裂解组采用动物细胞总蛋白提取试剂盒提取细胞总蛋白。在活细胞组中,将DA加入Bm12细胞并孵育6小时,然后提取蛋白质并定量进行酶解。上述蛋白加入蛋白酶K溶液(1g/mL),酶解1min并加入EDTA使蛋白酶失活,样品中加入蛋白质上样缓冲液。

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